Обследование внутренних органов начинают с внешнего осмотра. На серозных покровах органов или под ними могут быть обнаружены инкапсулированные личинки цестод и нематод. Особое внимание нужно обращать на личинок нематод, свернутых в плоские спирали.

Обследование мускулатуры ведется используя методы: параллельных разрезов мышечной ткани (разрезают поперек волокон на ломтики толщиной 5-10мм и просматривают их в падающем свете); просмотра мышечной ткани на просвет (с подсветкой снизу); просмотра сдавленных между двумя стеклами кусочков мышечной ткани - компрессорный метод.

Потенциально опасны гельминты, личинки которых находятся в рыбе в живом состоянии. Поэтому следует определить их жизнеспособность. Исследования проводят в отношении личинок, обнаруженных в свежей и охлажденной рыбе, если ее предполагается в таком виде направить на пищевое использование. В мороженой рыбе определение жизнеспособности личинок производится только в том случае, если со времени ее заморозки прошло менее двух месяцев. В течение этого срока все личинки в мороженой рыбе погибают.

Определение жизнеспособности личинок гельминтов может осуществляться следующими методами:

М е т о д ф и з и ч е с к о г о р а з д р а ж е н и я. Личинок нематод, цестод и скребней помещают в бактериологическую чашку на фильтровальную бумагу, обильно смоченную физиологическим раствором. Личинок рассматривают в бинокуляр. Если личинки живые, то через 1-2мин. можно заметить их слабую подвижность. Их движения можно стимулировать уколом личинки препаровальной иглой. Если личинка жизнеспособная, то укол вызывает сокращение тела. Метацеркарии трематод, заключенные в цисту, помещают на предметное стекло, добавляют сверху несколько капель воды или физраствора, накрывают сверху другим стеклом и помещают под микроскоп. Просмотр цист в течение нескольких минут позволяет заметить медленное движение внутри их метацеркариев, если они живые. Стимулировать движения можно путем осторожного надавливания на верхнее стекло, чтобы было видно легкое сдавливание оболочек цист.

М е т о д э л е к т р и ч е с к о г о с т и м у л и р о в а н и я. Применяется только к личинкам нематод, цестод и скребней (но не к метацеркариям трематод) и требует наличия источника слабого постоянного тока (0,5-1,5 В). Два тонких изолированных провода от положительного и отрицательного по-

люсов элемента подводятся к двум препаровальным иглам. Личинок, лежащих в тонком слое воды или на мокрой фильтровальной бумаге, нужно коснуться одновременно обеими иглами, наблюдая под бинокуляром наличие или отсутствие движения.

М е т о д х и м и ч е с к о г о в о з д е й с т в и я применим особенно к метацеркариям трематод. Личинок помещают в маленький объем 0,5%-го раствора трипсина, приготовленного на физрастворе (лучше при 36-37 о С). Если личинки жизнеспособны, раствор стимулирует их движение, а инцистированные метацеркарии трематод начинают выходить из цист (в течение 5 мин.).

При подозрении на зараженность рыб возбудителями гельминтозоонозов (описторхоз, клонорхоз, дифиллоботриоз и др.) в лабораторию направляют 15 экземпляров каждого вида рыб из данного водоема, партии или упаковки. Мелкие рыбы берут целиком, от крупных рекомендуют брать пробы.

Исследование рыбы на предмет поражения метагонимозом

У Т. сrassus биологический цикл такой же, но вторым промежуточным хозяином чаще служат рыбы семейства лососевых, преимущественно сиги, у которых личинки триенофоруса локализуются в мышцах. Личинки также окружены соединительнотканной капсулой и более крупных, размеров (до горошины). Плероцеркоиды триенофоруса необходимо дифференцировать от плероцеркоидов лентецов, которых они напоминают по величине и форме. Для этого личинку помешают между предметными стеклами, раздавливают и исследуют под малым увеличением микроскопа. Головной конец личинки триенофоруса вооружен двумя фиксирующими приспособлениями, каждый из которых имеет четыре крючка и напоминает силуэт летящей птицы. У личинок лентецов имеется присасывающая щель, крючки отсутствуют.

При хорошей и удовлетворительной упитанности и отсутствии гидремии мышечной ткани рыбу выпускают в потрошенном виде, истощенную рыбу бракуют и используют на кормовые цели.

Их помешают на предметное стекле, добавляют каплю дистиллированной воды, прикрывают другим другим стеклом и исследуют при малом увеличении микроскопа. Личинка овальной формы, размер ее 0,4 мм.

Рыбу при удовлетворительной упитанности выпускают без ограничения, истощенную рыбу используют на кормовые цели.

Рыбу при истощении или деформации тела выбраковывают. При отсутствии таких изменений ее направляют на предприятия общественного питания, где после удаления кожного покрова с чешуей проводят кулинарную обработку. Допускается использовать рыбу для производства консервов и не рекомендуется солить, коптить, мариновать и вялить.

При сильном поражении цистами (когда их количество превышает 20) или истощении рыбу утилизируют. При слабом поражении проводят зачистку и после потрошения направляют в кулинарную обработку или используют для приготовления консервов.

Пиявок удаляют, а рыбу выпускают без ограничения.

Рачок лорнеа ципринаус поражает карповых рыб. Он поселяется в коже, размер его 9-22 мм.

Рачков счищают с поверхности тела рыб плотными щетками, после чего рыбу выпускают без ограничения. Пораженные жабры следует удалить. При истощении и многих глубоких поражениях мышц рыбу направляют на кормовые цели.

Рыба, слабо пораженная круглыми червями, пригодна для использования на пищевые цели. При поражении кишечника, печени или обнаружении нематод в полости рыбу выпускают после потрошения. В случаях сильного поражения нематодами, когда мясо приобретает неприятный запах или имеет признаки водянки, рыбу направляют на кормовые цели или утилизируют.

Исследование рыбы, пораженной личинками жука-кожееда. Этот жук поражает только консервированную рыбу и особенно сушеную и вяленую. Самка откладывает яйца чаще всего в жабры. Через четверо суток из яйца выходит личинка -- шашел, которая и является вредителем рыбы. Шашел изнутри точит мягкие ткани рыбы, питаясь ими и превращая их в труху. Кроме того своими экскрементами он загрязняет рыбу и придает ей неприятный запах.

Санитарная оценка. При сильном поражении рыбы личинками жука кожееда, а также при неудовлетворительных органолептических показателях ее бракуют. При слабом поражении (шашел находится только в жаберной полости) рыбу выпускают без ограничений.

Исследование рыбы, пораженной личинками сырной мухи. Сырная муха откладывает яйца в жабры, ротовую полость рыб, плавники и даже в тару. Из яйца выходит личинка, которая претерпевает несколько стадий своего развития. В последней (третьей) стадии личинка очень подвижна, делает прыжки любую сторону. Она довольно быстро съедает мышечную ткань и от рыбы остаются скелет и кожа. Спустя 15--22 сутки личинка превращается во взрослую муху.

Санитарная оценка. При слабом поражении, когда личинка находиться на поверхности рыбы, ее очищают и выпускают без ограничений. При сильном поражении, что определяют по наличию в мышцах извилистых ходов личинок, рыбу бракуют и отправляют на техническую утилизацию.

В местностях, неблагополучных по гельминтозооно-зам рыб, проводят выборочное исследование отдельных экземпляров на личинки лентеца широкого и трематоды - описторхис (кошачьей двуустки) и метагонимуса. Попутно устанавливают зараженность рыбы и другими парази­тами.

В жабрах (реже наружных покровах) пресноводных рыб обитает рачок эргазилюс. Рачки похожи на белые крупинки. В пораженных жабрах обнаруживают крово­излияния и участки некротического распада.

Слизистые споровики в жабрах, подкожной клетчатке и внутренних органах (печень, почки) рыб образуют цисты, имеющие вид белых крупинок. Они достигают величины 1-5 мм.

Для исследования на метацеркарии метагонимуса кусочки плавников, жабр или чешую помещают между предметными стеклами и просматривают при малом увели­чении микроскопа. Метацеркарии метагонимуса овальной или шарообразной формы, диаметр их 0,18-0,21 мм. Личинки имеют слегка подковообразную форму, окру­жены цистой.

Внутренние органы рыб, больных лигулезом, сдавлены и анемичны.

Метацеркарии описторхиса представляют собой инкап­сулированные цисты овальной формы длиной около 0,3 мм и шириной около 0,24 мм. Они локализуются преимущественно в подкожной части спинных мышц. Для исследования на личинки описторхиса вырезают 2-3 ломтика мышц толщиной 2-3 мм, сдавливают между предметными стеклами и просматривают под малым увеличением микро­скопа. Характерное отличие личинки описторхиса - на­личие внутри цисты червячка - адолескария с двумя присосками и большого черного зернистого пятна.

Рыбу, пораженную плероцеркоидами лентеца широ­кого и метацеркариями описторхиса, проваривают в тече­ние 30 минут или используют для приготовления консер­вов. Допускается обезвреживать такую рыбу и замора­живанием: при поражении "плероцеркоидами лентеца широкого рыбу выдерживают в холодильных камерах при температуре -8° в течение семи суток или при -12° - трое суток; при поражении метацеркариями описторхиса рыбу промораживают до температуры не выше -15° и выдерживают не менее 14 суток.

Задание 3. Провести санитарное исследование икры.

План работы: 1) исследовать икру органолептически;

2) определить в икре содержание влаги;

3) определить в икре содержание поваренной соли;

4) исследовать икру на наличие песка;

5) исследовать икру на олово и свинец (это исследова­ние можно опустить);

6) определить в икре содержание нитратов;

7) определить в икре количество летучих оснований;

8) определить в икре кислотное число;

9) дать заключение о сортности икры и ее санитарном качестве.

Оборудование и реакти­вы: пробы икры различно­го качества; весы технохи-мические с разновесками; шпатели; шкаф сушильный; бюксы с песком; фарфоро­вые чашки; тигли; фильтры; колбы мерные на 100 мл и 500 мл; колбы конические; прибор для отгонки летучих веществ; ступки с пестика­ми; пробирки химические; азотнокислое серебро, 0,1 N раствор (в бюретке); калий хромовокислый; соляная кислота 10%-ная; уксусная кислота 5%-ная; хлористый натрий неочищенный; стан­дартная шкала для опреде­ления нитратов (см. в тек­сте); дифениламин в серной кислоте (см. в тексте); сер­ная кислота концентриро­ванная; смесь спирта с эфи­ром 1:2; фенолфтамил 1%-ный; калий едкий О,IN.

Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.

Для обнаружения трипанозом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки.

Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-ный раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому - Гимзе или гематоксилином и микроскопируют.

При осмотре кожного покрова можно видеть пигментированные пятна (черного цвета). В этих местах в толще кожи локализуются метацеркарии Posthodiplostomum cuticula. На плавниках встречаются цисты сосальщика Bucephalus.

Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут быть и в соединительных образованиях (бугорках); обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка с помощью препаровальной иглы. В кровеносных сосудах жабр встречаются яйца сангвиникол, споры и мицелий гриба.

Сердце вынимают вместе с крупными сосудами, помещают бактериологическую чашку с физилогическим раствором, вскрывают его полости, промывают образовавшийся осадок и микроскопируют на наличие возбудителя сангвиниколеза и некоторых метацеркариев.

Селезенку исследуют так же, как печень.

Мочевой пузырь . Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре обнаруживают сосальщиков, споровиков и инфузорий.

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков Myxosoma cerebralis Tetrocotyle variegateu.

Хрящи . Для обнаружения возбуителя миксозомоза (вертежа лососевых) компрессорным методом исследуют черепные и межпозвоночные хрящи.

Мазки крови окрашивают азур-эозином по Романовскому - Гимзе. Готовую краску Романовского перед окрашиванием разводят нейтральной дистиллированной водой из расчета 2 - 3 капли краски на 1 мл воды.

Слизистых споров окрашивают 1%-ным водным раствором метиленового синего 30 - 60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96%-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.

Мелких цестод мождно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20-60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам.

При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года - 3-4 дня. Затем их помещают на 4-6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-ной молочной кислоты). Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1%-ного раствора фенола. Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре 30-37°. Высохший очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта.

Для приготовления временных препаратов нематод не окрашивают, а кладут для просветления в неразведенную молочную кислоту или лактофенольный раствор (2 части глицерина, 1 часть молочной кислоты, 1 часть фенола и 1 часть воды) на 3-10 дней. Мелких гельминтов на 1-2 дня помещают в молочную кислоту (1-2 капли) и накрывают покровным стеклом.

Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят так. Фиксированных в 70 %-ном спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-ный, а затем в абсолютный спирт на 3-5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2-5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом.

Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-ного спирта переносят сначала в 50 %-ный глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.